Missplicing suppressor alleles of Arabidopsis PRE-MRNA Processing factor 8 increase splicing fidelity by reducing the use of novel splice sites

Abstract

El empalme eficiente requiere un equilibrio entre la selección del sitio de empalme (SS) de alta fidelidad y la velocidad. En Saccharomyces cerevisiae , el factor de procesamiento pre-ARNm 8 (Prp8) ayuda a equilibrar la selección precisa de SS y la escisión de intrones y la unión de exones rápida y eficiente. argonaute1-52 ( ago1-52 ) e incurvata13 ( icu13 ) son alelos hipomórficos de los genes de Arabidopsis thaliana ARGONAUTE1 ( AGO1 ) y AUXIN RESISTANT6 ( AXR6 ) que albergan mutaciones puntuales que crean nuevos 3′SS y 5′SS, respectivamente. El espliceosoma reconoce estos nuevos SS, así como los SS genuinos intactos, produciendo una mezcla de ARNm maduros aberrantes y de tipo salvaje. Aquí, caracterizamos cinco nuevos alelos mutantes de PRP8 (uno de los dos coortólogos de levadura Prp8 de Arabidopsis ), nombrando la morfología de estos alelos de ago1-52 suprimido5 ( mas5 ). En el fondo mas5-1 , el espliceosoma reconoce preferentemente el 3′SS genuino intacto de ago1-52 y el 5′SS de icu13 . Dado que las mutaciones puntuales que dañan los SS genuinos hacen que el espliceosoma sea propenso a reconocer SS crípticos, también analizamos los alelos de cuatro genes que portan SS genuinos dañados y descubrimos que mas5-1 no suprimió su error de empalme. Las mutaciones mas5-1 y mas5-3 representan una nueva clase de supresores de empalme incorrecto que aumentan la fidelidad del empalme al dificultar el uso de nuevos SS, pero no alteran el empalme general del pre-ARNm.