Diferenciación de la línea celular MED17.11 a nociceptores

Abstract

El dolor es una sensación sensorial y emocional desagradable que alerta al organismo frente a algún problema. Las neuronas nociceptorras son las encargadas de obtener información sobre el peligro o posible daño. La excitabilidad de las mismas se encuentra regulada por la actividad de diversos canales iónicos. Los nociceptores en general y determinados canales iónicos en particular se han convertido en los últimos años en las dianas para la creación de nuevos fármacos analgésicos. Debido a las dificultades de experimentación con DRG se trabaja en crear nuevos sistemas que permitan los estudios in vitro. Durante el trabajo se ha diferenciado la línea celular MED17.11 a nociceptores mediante protocolos de diferenciación. Se ha observado la expresión de ARNm y de proteína de los marcadores neuronales tales como TRPV1, TrkA, CGRP, canales de sodio y de potasio mediante técnicas de RT-PCR y Western blot. Además, se han localizado los marcadores TRPV1 y TrkA en la célula a lo largo de la diferenciación de las mismas y también se ha mirado la funcionalidad de los canales de TRPV1 mediante técnicas de calcio. Se ha observado expresión de los marcadores neuronales tanto del ARNm como de la proteína. No obstante, no se ha observado funcionalidad en TRPV1. Además en cuanto a morfología de las células a los distintos días de diferenciación no se ha observado homogeneidad. Esto sugiere que la diferenciación de las mismas no ha sido la correcta o solo parcial y que se deberán cambiar los protocolos de diferenciación para obtener resultados favorables.

Pain is an unpleasant sensory and emotional feeling that alerts the organism against harmful stimuli. Nociceptors are neurons that respond to noxious stimuli and their activation can result in pain. The excitability of nociceptors is regulated by the activity of different ion channels. In the past few years, nociceptors and the ion channels they express have become targets for the development of new analgesic drugs. Due to the difficulties in the experimentation with primary cultures of dorsal root ganglia (DRG), new systems are being developed that allow in vitro studies. In this work, MED17.11 cells have been differentiated to nociceptors through differentiation protocols. The expression of mRNA and its protein product of neuronal targets like TRPV1, TRKA, CGRP, sodium and potassium channels have been observed through RT-PCR and Western blot techniques. Furthermore, TRPV1 and TrkA were observed in the cells along their differentiation. The functional expression of TRPV1 in MED17.11 cells has been studies through fluorescent calcium images techniques. The mRNA and protein products of several neuronal targets have been successfully observed. However, calcium imaging studies have shown that the TRPV1 as expressed by the MED17.11 cells was not functional. Furthermore, the cells were not morphologically homogeneous during the different differentiation days. These results suggests that the cells did not differentiate correctly and the differentiation protocol needs to be changed in order to obtain successfully differentiated MED17.11 cells