Puesta a punto de la plataforma de patch clamp automático IonFlux para realizar cribados de alto rendimiento en Kv1.1

Abstract

El aumento de las patologías asociadas a canales iónicos durante los últimos años sitúa la investigación en canalopatias en el foco de la actualidad. Desórdenes musculares, cardiacos o enfermedades como la epilepsia se han relacionado con la implicación del canal iónico Kv1.1. La creciente demanda por parte de la industria farmacéutica de nuevas tecnologías con las que afrontar la búsqueda de fármacos frente a estas dianas hace necesario mejorar el rendimiento, disminuir los costes y aumentar la precisión de las técnicas existentes. En este trabajo el objetivo es poner a punto una técnica de cribados de alto rendimiento mediante IonFlux, una novedosa plataforma de electrofisiología automática. En la puesta a punto realizamos una caracterización electrofisiológica con la línea celular HEK-hBk1, que expresa Kv1.1, mediante patch clamp manual. Los resultados obtenidos son similares a los que recoge la bibliografía tanto a nivel biofísico como farmacológico con respecto a las interacciones de este canal con el compuesto inhibitorio 4-Aminopiridina (4-AP). El segundo paso fue la puesta a punto del cultivo para satisfacer los requisitos del sistema modificando diversos parámetros. Bajo estas condiciones se midieron las corrientes obteniéndose una respuesta farmacológica similar a la obtenida con patch clamp manual. En conclusión, este trabajo final de grado aúna el uso de una emergente diana terapéutica como son los canales de potasio con la puesta a punto de una de las técnicas más novedosas en el mundo de la farmacología ofreciendo como resultado unas posibles condiciones óptimas para el uso masivo de esta.