Contribución al análisis funcional de POL5, RRP36, UTP22 y UTP18 mediante el silenciamiento parcial de su expresión con microARN artificiales

Abstract

En este Trabajo de Fin de Máster (TFM) hemos contribuido a la caracterización funcional de los genes DNA POLYMERASE V (POL5), RIBOSOMAL RNA PROCESSING 36 (RRP36), U THREE PROTEIN 18 (UTP18), UTP22 y BMh SENSITIVE 1 (BMS1) en Arabidopsis thaliana, cuyos ortólogos de Saccharomyces cerevisiae codifican proteínas que forman parte del procesoma SSU, que es clave para la maduración del ARN ribosómico (ARNr) 18S y el ensamblaje de la subunidad menor del ribosoma o 40S. Se han estudiado los efectos de la inactivación parcial de estos genes en líneas amiR-POL5, amiR-RRP36, amiR-UTP18 y amiR-UTP22, portadoras de transgenes que expresan microARN artificiales (líneas amiR) y que fueron obtenidas en el laboratorio antes del inicio de este trabajo. Paralelamente, hemos iniciado el análisis funcional del gen BMS1, mediante el análisis del mutante puntual denticulata9 (den9), y de dos mutantes insercionales. Los fenotipos morfológicos y moleculares de plantas de algunas de estas líneas amiR y de den9, sugieren que POL5, RRP36, UTP18, UTP22 y BMS1 de Arabidopsis son factores de la biogénesis del ribosoma, actuando en la maduración del ARNr 18S, como sus ortólogos de la levadura.

In this Master's Thesis, we have contributed to the functional characterization of the DNA POLYMERASE V (POL5), RIBOSOMAL RNA PROCESSING 36 (RRP36), U THREE PROTEIN 18 (UTP18), UTP22, and BMh SENSITIVE 1 (BMS1) genes in Arabidopsis thaliana, whose orthologs in Saccharomyces cerevisiae encode proteins that are part of the SSU processome, involved in ribosomal RNA (rRNA) 18S maturation and assembly of the small ribosomal subunit or 40S. The effects of the partial inactivation of these genes have been analysed in several amiR-POL5, amiR-RRP36, amiR-UTP18, and amiR-UTP22 lines, carrying transgenes expressing artificial microRNAs (amiR lines) that were generated in the laboratory prior to the start of this work. Additionally, we have initiated the functional analysis of the BMS1 gene by analyzing the denticulata9 (den9) mutant and two insertional lines that disrupt it. The morphological and molecular phenotypes of plants of several amiR lines and den9 suggest that Arabidopsis POL5, RRP36, UTP18, UTP22, and BMS1 proteins are also involved in ribosome biogenesis, acting in the maturation of 18S rRNA, similar to their yeast orthologs.