Contribución al análisis funcional de los genes de la ruta de los microARN en Arabidopsis

Abstract

Los microARN (miARN) son ARN endógenos y de pequeño tamaño que regulan la expresión génica a nivel post-transcripcional, inhibiendo la traducción o induciendo la degradación de sus ARNm diana, de los que son complementarios. En el laboratorio de la profesora María Rosa Ponce se han obtenido mutantes de varios de los genes de la maquinaria de los miARN, y en este Trabajo de Fin de Máster hemos investigado otras posibles funciones de estos genes. Hemos analizado las interacciones entre genes de esta ruta (AGO1 y HYL1) y de la remodelación de la cromatina (FAS1), así como investigado su posible implicación en la biogénesis del ribosoma. Con este objetivo hemos obtenido los dobles mutantes fas1-1 ago1-52, fas1-1 ago1-27, fas1-1 hyl1-2 y fas1-1 hyl1-11, cuyos fenotipos sinérgicos sugieren una conexión entre las rutas de regulación génica y el ensamblaje de la cromatina. Además, hemos realizado hibridaciones de northern para determinar si existe una alteración en los mutantes de la maquinaria de los miARN en la maduración de los ARN ribosómicos (ARNr), puesto que resultados previos del laboratorio apuntaban a su participación en la biogénesis del ribosoma. Hemos determinado que el mutante hyl1-12 presenta múltiples alteraciones en el procesamiento del pre-ARNr 45S, lo que indicaría la participación de HYL1 en este proceso.

miRNAs are endogenous and small RNAs that regulate gene expression at post-transcriptional level, inhibiting translation or inducing the degradation of their target mRNAs, of which are complementary. In the laboratory of Maria Rosa Ponce, some mutants of the miRNA machinery have been obtained, and in this TFM we have investigated other possible functions of these genes. We have analyzed the interactions between the genes involved in this process (AGO1 and HYL1) and in chromatin remodeling (FAS1). With this objective, we have obtained the double mutants fas1-1 ago1-52, fas1-1 ago1-27, fas1-1 hyl1-2 and fas1-1 hyl1-11, whose synergistic phenotypes suggest a connection between these processes. In addition, we have performed northern blot hybridizations to determine if the maduration of the rRNAs is altered in the mutants of the miRNA machinery, because our previous results pointed to their participation in the biogenesis of the ribosome. We have determined that the processing of the 45S pre-rRNA is defective in the hyl1-12 mutant, suggesting the participation of HYL1 in this process.