Análisis genético de genes de Arabidopsis que codifican presuntos interactores de la proteína ICU11

Abstract

El gen INCURVATA11 (ICU11) codifica un componente de la maquinaria epigenética de Arabidopsis thaliana cuya función molecular concreta se desconoce. En un escrutinio de interactores de ICU11, basado en el ensayo del doble híbrido de la levadura, se identificaron en el laboratorio de José Luis Micol tres proteínas que participan en la ruta de la metilación dependiente de la S-adenosil-L-metionina (SAM): ADENOSINE KINASE 2 (ADK2), COBALAMIN-INDEPENDENT METHIONINE SYNTHASE (CIMS) y DEREPRESSED FOR RIBOSOMAL PROTEIN S14 EXPRESSION 2 (DRE2). Con el fin de confirmar estos resultados, hemos estudiado en este Trabajo de Fin de Grado las interacciones genéticas de ICU11 con ADK2, DRE2 y CIMS, así como con otros dos genes relacionados con el ciclo de la SAM: S-ADENOSYL-L-HOMOCYSTEINE HYDROLASE 1 (SAHH1) y ADK1, un parálogo de ADK2. Hemos obtenido alelos mutantes de estos genes y sus combinaciones dobles con icu11-1, y caracterizado sus fenotipos. También hemos generado transgenes productores de microARN artificiales y pequeños ARN interferentes sintéticos que actúan en trans, a fin de determinar los efectos fenotípicos de la pérdida de función parcial de los genes a estudio, en plantas icu11-1 y del tipo silvestre Col-0.

The INCURVATA11 (ICU11) gene encodes a component of the epigenetic machinery of Arabidopsis thaliana, whose specific molecular function is unknown. In a screen for ICU11 interactors, based on the yeast two-hybrid assay, three proteins were identified in the laboratory of José Luis Micol, which participate in the S-adenosyl-L-methionine (SAM)-dependent methylation pathway: ADENOSINE KINASE 2 (ADK2), DEREPRESSED FOR RIBOSOMAL PROTEIN S14 EXPRESSION 2 (DRE2), and COBALAMIN-INDEPENDENT METHIONINE SYNTHASE (CIMS). In this End of Degree Assignment, we studied the genetic interactions of ICU11 with ADK2, DRE2 and CIMS, as well as with two other genes related to the SAM cycle: S-ADENOSYL-L-HOMOCYSTEINE HYDROLASE 1 (SAHH1) and ADK1, an ADK2 paralog. We obtained mutant alleles of these genes and their double mutant combinations with icu11-1, and characterized their phenotypes. We also generated transgenes producing artificial microRNAs and synthetic trans-acting small interfering RNAs, to ascertain the phenotypic effects of the partial loss of function of the genes under study in icu11-1 and wild-type genetic backgrounds.