Los eritrocitos nucleados de peces en la inmunización frente a rhabdovirus

Abstract

La acuicultura es el cultivo de organismos acuáticos con el fin de aumentar su rendimiento y producción. Es catalogado como uno de los sectores de producción de alimentos de más rápido crecimiento. La intensa acuicultura desarrollada en los últimos años, favorece la susceptibilidad a patógenos. Los rhabdovirus se encuentran entre los virus que causan mayores pérdidas en acuicultura. Los virus de la familia Rhabdoviridae y sus hospedadores han sido ampliamente estudiados con el fin de desarrollar medidas profilácticas frente a las infecciones virales. Entre estas medidas, la vacunación ha resultado la más efectiva y las vacunas DNA, desarrolladas en los últimos años, las más prometedoras en acuicultura. Sin embargo la extrapolación de las vacunas DNA efectivas frente a algunos virus a otros virus patógenos ha resultado insatisfactoria. Por ello es necesaria más investigación para el desarrollo de vacunas eficaces frente a patógenos en acuicultura. En este contexto, aparecen los eritrocitos (RBCs, del inglés “Red blood cells”) de peces. Estas células nucleadas han sido poco investigadas ya que hasta hace poco se creía que su función era meramente el transporte de oxígeno en el organismo. En la última década se ha descrito que los RBCs son capaces de internalizar patógenos y liberar citoquinas frente a estímulos, otorgándoles otras funciones, hasta hace poco desconocidas. En esta tesis, pretendemos dilucidar el papel de estas células en la inmunización de peces con una vacuna DNA frente a un rhabdovirus, el virus de la septicemia hemorrágica viral (VHSV), y su posible utilización en el diseño de estrategias para el desarrollo de nuevas vacunas eficaces frente a rhabdovirus. Para ello, analizamos el perfil de transcriptómica y proteómica de RBCs de trucha arcoíris transfectados con una vacuna DNA que codifica el gen de la glicoproteína G de VHSV (GVHSV), así como de RBCs tras la inmunización de individuos con GVHSV. El método de purificación de los RBCs mediante clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS) y el proceso de análisis de transcriptómica y proteómica para estas células fueron puestos a punto durante el desarrollo de esta tesis. Los resultados mostraron que los RBCs de trucha sobreexpresan genes y proteínas relacionados con la presentación de antígenos, el sistema de interferón y la comunicación con otras células, entre otros. También analizamos la capacidad de comunicación de los RBCs transfectados con GVHSV con otros tipos celulares. Finalmente, el estudio se extendió a la evaluación de la respuesta inmune de los RBCs a las vacunas basadas en proteínas recombinantes. Todo ello con el fin de evaluar el uso potencial de los RBCs como transportadores o dianas de vacunas DNA y/o inmunoestimulantes en la profilaxis de peces.