Identificación y caracterización de nuevos moduladores del canal iónico TRPV1 basados en la técnica PROTAC

Abstract

Los receptores de potencial transitorio (TRP) son una superfamilia de canales iónicos multifuncionales permeables a una gran variedad de cationes, y cuya activación puede darse por estímulos físicos (temperatura, voltaje, presión y tensión) y químicos. En los últimos años han sido estudiados en profundidad debido a su implicación en numerosas patologías, como trastornos cardiovasculares, cáncer o dolor crónico. Dentro de la subfamilia TRPV, el canal iónico TRPV1 posee una enorme importancia por su polimodalidad y su implicación en enfermedades ampliamente distribuidas, siendo por tanto uno de los más estudiados como posible diana terapéutica. En este contexto, los compuestos PROTAC, encargados de inducir la degradación de proteínas, podrían ser uno de los tratamientos más prometedores para inhibir la actividad patológica de TRPV1. Por todo ello, en el presente trabajo se ha estudiado el efecto de ocho compuestos PROTAC sobre TRPV1, realizando un cribado inicial para estudiar cuales de ellos pueden resultar más prometedores. Además, se realizaron ensayos de permeabilización de la membrana y citotoxicidad para descartar posibles efectos nocivos. Por último, se realizó un ensayo de detección y cuantificación proteica, Western Blot, optimizando previamente el protocolo. En conjunto, bajo las condiciones ensayadas, no se pudo determinar que los compuestos indujeran la degradación del canal. Transient receptor potential (TRP) channels are a superfamily of multifunctional ion channels permeable to a wide variety of cations, whose activation can occur in response to physical (temperature, voltage, pressure, and tension) and chemical stimuli. In recent years, they have been studied extensively due to their involvement in numerous pathologies, such as cardiovascular disorders, cancer, and chronic pain. Within the TRPV subfamily, the ion channel TRPV1 is of great importance due to its polymodality and its involvement in widely distributed diseases, making it one of the most studied targets for potential therapeutic intervention. In this context, PROTAC compounds, which induce protein degradation, could represent one of the most promising treatments to inhibit the pathological activity of TRPV1. For this reason, the present project investigated the effect of eight PROTAC compounds on TRPV1, performing an initial screening to identify the most promising candidates. In addition, membrane permeability and cytotoxicity assays were conducted to rule out possible adverse effects. Finally, a protein detection and quantification assay, Western Blot, was performed, after first optimizing the protocol. Overall, under the conditions tested, it was not possible to demonstrate that the compounds induced channel degradation.