Establecimiento de sistemas de co‐cultivo celular para el estudio de la respuesta antiviral en lı́neas celulares de pez

Abstract

Estudios previos demuestran que el virus IPN es capaz de establecer una infección persistente tanto in vivo como in vitro en cultivos de la línea celular EPC. Estos cultivos, que llamamos EPCIPNV muestran resistencia a la superinfección con virus heterólogos como el virus de la septicemia hemorrágica vírica, así como la secreción de factores antivirales. En este trabajo se analiza en detalle la inducción de la respuesta antiviral mediante el uso de dos sistemas co-cultivo dónde las células efectoras (EPCIPNV) y las células diana (EPC) se cultivan separadamente, y luego se ponen en contacto para estudiar su interacción y examinar la respuesta a la superinfección por VHSV. Mediante el primer sistema basado en rejillas de plástico, hemos observado que células EPC que han sido expuestas a estos efectores presentan una protección contra VHSV. Hemos desarrollado un segu ndo sistema de co-cultivo denominado Transwell® dónde las células efectoras están separadas de las células diana por una membrana porosa. Utilizando el co-cultivo en Transwell® hemos llegado a resultados similares al anterior. Además, medidas de RT-PCR cuantitativa de la expresión de interferón (ifn) y del gen mx en las células efectoras y dianas sugieren una correlación entre el incremento de la respuesta celular inmune innata y la inducción de un estado antiviral