Expresión y purificación de una proteína que funciona como un canal iónico de potasio (KcsA)

Abstract

La importancia de los canales iónicos radica, no sólo en su implicación en procesos biológicos clave, sino en el hecho de que son dianas terapéuticas reales y potenciales. Entre estos canales iónicos encontramos los canales de potasio, involucrados en numerosos procesos celulares de vital importancia. Debido a la complejidad de estas proteínas, durante los últimos años se ha prestado especial atención a la expresión de sus homólogos procariotas, en este sentido, el canal KcsA constituye un modelo sencillo para el estudio de canales de potasio eucariotas más complejos. Durante este proyecto, se ha llevado a cabo la expresión y caracterización funcional de un canal de potasio de origen procariota: KcsA. Para ello se han utilizado dos cepas de E.coli: BL21 y M15, debido a su capacidad de expresión de la proteína de interés. Con este trabajo, se pretende determin ar el rendimiento de expresión de la proteína en ambas cepas y estudiar sus características funcionales. Tras finalizar los experimentos de expresión de la proteína y purificación, se obtuvo que la cepa BL21 presentó mayor rendimiento que la cepa M15 a la hora de expresar el canal KcsA. Por otra parte, mediante medidas electrofisiológicas se obtuvieron registros de rampas y continuos a -150 y +150mV similares en KcsA-WT expresado en ambas cepas. Por todo lo expuesto se concluye que se puede expresar indistintamente KcsA-WT en ambas cepas con resultados satisfactorios, siendo la cepa BL21 la que presenta un mayor rendimiento.