https://hdl.handle.net/11000/1180 2026-08-11T06:04:44Z https://hdl.handle.net/11000/40318 Título : Desarrollo de Nanoestructuras Poliméricas con Ltriptófano y 5-aminolevulínico para diferentes tratamientos Autor : Antón Gil, María Resumen : En los avances actuales acerca de la investigación sobre nanoestructuras de fármacos u otros compuestos de interés los polímeros son materiales con alto interés debido a su variedad y versatilidad. En el siguiente trabajo se han sintetizado nanopartículas preparadas usando como matriz polimérica principal el poli (metil vinil éter-alt-ácido maleico monoetil éster) (PMVEMA-ES). Las nanopartículas obtenidas han sido caracterizadas por dispersión de luz dinámica (DLS) y microscopía electrónica de barrido (FSEM). Como compuestos activos seleccionados se encapsuló el fármaco 5-aminolevulíno (5-ALA) y el aminoácido L-Triptófano. En ambos casos, los diámetros obtenidos fueron de 200-600 nm obteniéndose una eficacia de encapsulación cercana al 100% en el caso del 5-ALA y muy baja en el caso del aminoácido por HPLC y espectroscopía de absorción respectivamente.; In the current advances in research on nanostructures of drugs or other compounds of interest, polymers are materials of great interest due to their variety and versatility. In the following work we have synthesized nanoparticles prepared using poly(methyl vinyl ether-alt-maleic acid monoethyl ester) (PMVEMA-ES) as the main polymeric matrix. The obtained nanoparticles have been characterized by dynamic light scattering (DLS) and scanning electron microscopy (FSEM). The drug 5-aminolevulin (5-ALA) and the amino acid L-tryptophan were encapsulated as selected active compounds. In both cases, the diameters obtained were 200-600 nm obtaining an encapsulation efficiency close to 100% in the case of 5-ALA and very low in the case of the amino acid by HPLC and absorption spectroscopy respectively.In the following work we have synthesized nanoparticles prepared using poly(methyl vinyl vinyl etheralt-maleic acid monoethyl ester) (PMVEMA-ES) as the main polymeric matrix. The obtained nanoparticles have been characterized by dynamic light scattering (DLS) and scanning electron microscopy (FSEM). The drug 5-aminolevulin (5-ALA) and the amino acid L-tryptophan were encapsulated as selected active compounds. In both cases, the diameters obtained were 200-600 nm, obtaining an encapsulation efficiency close to 100% in the case of 5-ALA and very low in the case of the amino acid by HPLC and absorption spectroscopy, respectively. 2026-07-31T10:37:33Z https://hdl.handle.net/11000/40317 Título : Preparación y caracterización morfológica y funcional de nanofibras con Lisozima Autor : Lozoya Agulló, María Jesús Resumen : Hoy en día, los nanocompuestos están adquiriendo mayor popularidad en diversos campos, entre ellos el de la biomedicina. Las nanofibras son nanomateriales particularmente útiles para encapsular compuestos terapéuticos. En este trabajo, se realizaron nanofibras empleando un polímero, el óxido de polietileno, y una proteína, la lisozima. La concentración de polímero se mantuvo fija, 3 %, mientras que la de lisozima fue aumentando en un rango de entre 5 y 20 %. De estas disoluciones se comprobó su viscosidad, la cual fue aumentando con la concentración de lisozima y mantuvo una relación con la capacidad para electrohilar y con el diámetro de las nanofibras obtenidas. Además, la proteína encapsulada en las fibras fue capaz de mantener su integridad y estructura, lo que se comprobó mediante electroforesis y espectroscopía de infrarrojos, respectivamente. Los ensayos antimicrobianos permitieron demostrar que la actividad también se mantuvo intacta respecto a las condiciones normales, ya que la bacteria gram positiva Bacillus circulans se vio inhibida.; Nowadays, the nanocomposites are becoming more popular in various fields, including biomedicine. Nanofibers are nanomaterials particularly useful for encapsulating therapeutic compounds. In this work, nanofibers were made using a polymer, polyethylene oxide, and a protein, lysozyme. The polymer concentration was set on 3 %, while the lysozyme increased in a range between 5 and 20 %. The viscosity of these solution was verified, which increased with the concentration of lysozyme and has a relation with the capacity for electrospinning and the nanofibers diameter. Furthermore, the encapsulated protein in the fibers was able to maintain its integrity and structure, which was confirmed by electrophoresis and infrared spectroscopy, respectively. Antimicrobial tests showed that the activity was also maintained intact compared to normal conditions, since the Gram-positive bacteria Bacillus circulans was inhibited. 2026-07-31T10:36:46Z https://hdl.handle.net/11000/39716 Título : Life Merlin: Proyecto europeo para la maximización de la producción de biogás en estaciones depuradoras de aguas residuales Autor : Pascual Albero, Paula Resumen : En el marco de las energías renovables y la economía circular se desarrolla el proyecto LIFE MERLIN, cofinanciado por la Unión Europea, cuyo objetivo es maximizar la producción de biogás en las EDARs mediante la adición de cosustratos, procedentes de la industria alimentaria, en el proceso de digestión anaerobia de los fangos. Resulta fundamental conocer el Potencial Bioquímico de Metano (BMP) de los distintos residuos (cosustratos) así como sus posibles restricciones por inhibición del proceso (toxicidad) para seleccionar los adecuados. Estos ensayos se han realizado a escala de laboratorio, empleando el novedoso equipo AMPTS III Light, adquirido recientemente en el ámbito del proyecto MERLIN. En el presente trabajo se ha efectuado tanto la puesta en marcha del citado equipo empleando celulosa microcristalina, de BMP conocido (410 L CH₄/Kg SV), como la caracterización de varios cosustratos (aguas azucaradas procedentes de industrias de golosinas y edulcorantes), obteniendo resultados satisfactorios. Los cuatro cosustratos analizados, reflejaron valores de BMP entre 485 y 628 L CH₄/Kg SV. En consonancia con el origen de los residuos, todas las muestras indicaron toxicidad nula y muy alta biodegradabilidad, alcanzando el 100% a los pocos días de iniciar el proceso.; Within the framework of renewable energy and the circular economy, the LIFE MERLIN project, co-funded by the European Union, aims to maximize biogas production in WWTPs by adding co-substrates from the food industry to the anaerobic digestion process of sewage sludge. It is essential to determine the Biochemical Methane Potential (BMP) of different wastes (co-substrates), as well as any potential process inhibition constraints (toxicity), in order to select the most suitable ones. These tests were carried out at laboratory scale using the innovative AMPTS III Light equipment, recently acquired within the framework of the MERLIN project. In this Bachelor’s Thesis, both the commissioning of the aforementioned equipment—using microcrystalline cellulose with a known BMP (410 L CH₄/Kg SV)—and the characterization of several co-substrates, sugary wastewater from confectionery and sweetener industries were performed, obtaining satisfactory results. The analyzed co-substrates showed BMP values ranging between 485 and 628 L CH₄/Kg SV. In accordance with the origin of the wastes, all samples showed no toxicity and very high biodegradability (reaching 100% within a few days after the start of the process). Notas: En portada: "Aguas de Alicante". 2026-04-02T08:28:35Z https://hdl.handle.net/11000/39375 Título : Interacciones del reactivo DTNB en colinesterasas y de la acetiltiocolina en las actividades fenilvaleratoesterasa y fenilacetatoesterasa de la butirilcolinesterasa humana Autor : Gordo Martín, Guillermo Resumen : Se ha visto en trabajos previos que la acetiltiocolina (AtCh) a bajas concentraciones aumenta actividad fenilvalerato esterasa (PVasa) en acetilcolinesterasa recombinante humana (AChE) y se inhibe a altas concentraciones. Sin embargo, la actividad fenilacetato esterasa (FAc esterasa) es inhibida a bajas concentraciones de AtCh. La potenciación o inhibición de estas actividades son causadas por la tiocolina liberada en el sitio activo, donde AtCh podría actuar como un caballo de Troya. En este trabajo se han evaluado la actividad PVasa y FAc esterasa en presencia de AtCh con butirilcolinesterasa (BChE) recombinante humana en condiciones similares de ensayo. Los resultados muestran que no se observan interacciones de la AtCh con la actividad PVasa en dichas condiciones experimentales. Por otro lado, se ha visto que el DTNB, reactivo cromogénico utilizado para medir la actividad colinesterasa con colinesterasas en ensayos en continuo (sin detener la reacción), produce cierta inhibición de esta actividad. En este trabajo se han realizado experimentos a tiempo fijo (parando la reacción) para poder determinar la influencia del DTNB en la actividad colinesterasa con AChE y BChE humanas. Se ha observado que hay inhibición de la actividad colinesterasa por DTNB cuyos resultados sugieren que existe un mecanismo más complejo que una inhibición reversible simple en BChE mientras que se ha observado una inhibición leve con AChE que sugiere que la inhibición es reversible.; Previous studies have shown that acetylthiocholine (AtCh) at low concentrations increases phenyl valerate esterase (PVase) activity in recombinant human acetylcholinesterase (AChE) and is inhibited at high concentrations. However, phenylacetate esterase (FAc esterase) activity is inhibited at low concentrations of AtCh. The potentiation or inhibition of these activities is caused by the thiocholine released in the active site, where AtCh could act as a Trojan horse. In this work, PVase and FAc esterase activity have been evaluated in the presence of AtCh with recombinant human butyrylcholinesterase (BChE) under similar assay conditions. The results show that no interactions of AtCh with PVase activity are observed under these experimental conditions. On the other hand, it has been observed that DTNB, the chromogenic reagent used to measure cholinesterase activity in continuous assays (without stopping the reaction), produces some inhibition of this activity. In this work, fixed-time experiments (stopping the reaction) have been carried out in order to determine the influence of DTNB on cholinesterase activity with human AChE and BChE. It has been observed that there is inhibition of cholinesterase activity by DTNB, and the results suggest a mechanism more complex than simple reversible inhibition in BChE, while a mild inhibition has been observed with AChE that suggests the inhibition is reversible. 2026-02-20T09:29:57Z https://hdl.handle.net/11000/39339 Título : Nanopartículas funcionalizadas como soporte para el mantenimiento de la actividad de biomoléculas durante su almacenamiento Autor : Blasco Andreu, María Resumen : El uso de enzimas en aplicaciones biotecnológicas es cada vez mayor, lo que implica tanto el almacenamiento de dichas enzimas, como la preservación de su actividad biológica. La catalasa, cataliza reacciones de oxidación para proteger a las células de especies reactivas de oxígeno (ROS), oxidación de colorantes, entre otros. Esta enzima es inestable en disolución, lo cual conlleva a su agregación y por tanto pérdida de actividad, lo que se traduce en una gran pérdida económica. Por lo anteriormente comentado, se pretende estudiar el uso de nanopartículas magnéticas de magnetita (Fe₃O₄) recubiertas con polietilenimina (PEI) para adsorber y estabilizar la catalasa. Para ello se evaluaron diferentes estrategias, como el recubrimiento mediante la técnica de recubrimiento capa a capa con polielectrolitos como alginato, PAA y PEI, aunque ninguno logró formar una capa protectora estable, siendo el enzima liberado de la nanopartícula, y por lo tanto, no protegida. A pesar de que el enzima no ha podido ser encapsulado, el hecho de que se encuentre adsorbido sobre la nanopartícula, o en contacto directo con PEI, hace que se preserve la actividad con respecto a la catalasa libre en disolución. Esta metodología muestra un elevado potencial para el desarrollo de estrategias que permitan el almacenamiento a largo plazo de biomoléculas lábiles. Mostrando el potencial de estas estructuras para aplicaciones orientadas a la conservación de proteínas activas.; The use of enzymes in biotechnological applications is increasingly widespread, which involves both the storage of these enzymes and the preservation of their biological activity. Catalase catalyzes oxidation reactions to protect cells from reactive oxygen species (ROS), as well as the oxidation of dyes, among other functions. This enzyme is unstable in solution, which leads to aggregation and, consequently, loss of activity—resulting in significant economic losses. For these reasons, this study aims to investigate the use of magnetite (Fe₃O₄) magnetic nanoparticles coated with polyethylenimine (PEI) to adsorb and stabilize catalase. Different strategies were evaluated, including layer-by-layer(LbL) coating with polyelectrolytes such as alginate, PAA, and PEI. However, none of them succeeded in forming a stable protective layer, and the enzyme was released from the nanoparticle, leaving it unprotected. Although full encapsulation of the enzyme was not achieved, its adsorption onto the nanoparticle surface or direct interaction with PEI helped preserve its activity compared to free catalase in solution. This methodology demonstrates strong potential for developing strategies aimed at the long-term storage of labile biomolecules, highlighting the value of these structures for applications focused on the preservation of active proteins. 2026-02-19T12:33:08Z https://hdl.handle.net/11000/37803 Título : Respuesta de Streptococcus mutans ante diversas aminas bicíclicas Autor : Díaz Riquelme, Marta Resumen : Streptococcus mutans es la principal bacteria causante de los procesos cariogénicos en la cavidad bucal debido a su capacidad de colonizar el esmalte y contribuir a la formación de la placa dental (un biofilm originado por diversas especies bacterianas). La placa dental protege a S. mutans del ambiente que lo rodea, por lo que la viabilidad celular se ve aumentada. En este Trabajo de Fin de Grado se ha hecho uso de protocolos de formación in vitro de biofilm y tinción de este, de manera que sea posible estudiar la capacidad de diversas aminas bicíclicas para inhibir in vitro la formación de biofilms de S. mutans. A su vez, se evaluó la combinación de promazina, una bicíclica que afecta a S. mutans con el antibiótico estreptomicina para realizar pruebas de sinergia, de manera que posteriormente se puedan realizar pruebas en modelos in vivo para poder usar dichas moléculas como agentes de higiene bucodental. Streptococcus mutans is the main bacterium that causes cariogenic processes in the oral cavity due to its ability to colonize enamel and contribute to the formation of dental plaque (a biofilm caused by various bacterial species). Dental plaque protects S. mutans from its surrounding environment, thereby increasing cell viability. This thesis uses in vitro biofilm formation and staining protocols to study the ability of several bicyclic amines to inhibit S. mutans biofilms formation in vitro. In turn, the combination of promazine, a bicyclic amine that affects S. mutans with the antibiotic streptomycin was evaluated to perform synergy test, enabling subsequent testing in in vivo models to use those molecules as oral hygiene agents. 2025-11-03T16:42:34Z https://hdl.handle.net/11000/37802 Título : Idoneidad de las aproximaciones ómicas en estudios oncológicos a partir de tejido fijado y parafinado Autor : Ocaña Vidal, Alejandra Resumen : El glioblastoma (GBM) es uno de los tumores cerebrales más agresivos y de peor pronóstico en la actualidad, lo que resalta la importancia clínica del uso de biomarcadores fiables para su diagnóstico y seguimiento. En los últimos años, se ha prestado una mayor atención a los efectos que el proceso de fijación y embebido en parafina (FFPE) puede tener sobre el material genético, y cómo estos pueden comprometer la fiabilidad de ciertos biomarcadores moleculares. En este estudio se ha llevado a cabo un análisis bioinformático de más de 30.000 genes procedentes de tejido fresco y más de 40.000 de tejido parafinado, con el objetivo de identificar posibles diferencias estructurales y funcionales en el ARN que puedan influir en su susceptibilidad al proceso de parafinado. Algunos de los resultados obtenidos fueron validados experimentalmente mediante PCR a tiempo real (qPCR). Además, se analizaron los perfiles de metilación en sitios CpG de ambos tipos de tejido, con el fin de evaluar si existen variaciones epigenéticas que puedan contribuir a las diferencias observadas. Glioblastoma (GBM) is one of the most aggressive and with the worst prognosis cerebral tumor nowadays, highlighting the clinical importance of reliable biomarkers for its diagnosis and monitoring. In recent years, the effects of the fixation and paraffin-embedding process (FFPE) on the genetic material and how this process may compromise the reliability of certain biomarkers have been considered. In this study, a bioinformatic analysis of more than 30.000 genes from fresh tissues and more than 40.000 genes from paraffin-embedded tissues was carried out to identify if there are structural and functional differences in RNA that may influence their susceptibility to the paraffin-embedded process. Some of these results were experimentally validated by real-time PCR (qPCR). Moreover, metylation profiles of CpG sites from both tissue types were analyzed in order to evaluate whether there are epigenetic variations that may contribute to the observed differences. 2025-11-03T16:42:00Z https://hdl.handle.net/11000/37801 Título : Interacción de retardantes de llama organobromados con carboxilesterasas de suero: TBBPA como modelo Autor : Garijo García, Carmen Resumen : Los retardantes de llama bromados, como el tetrabromobisfenol A (TBBPA), son contaminantes capaces de interferir en enzimas clave para la detoxificación, como las carboxilesterasas. En este trabajo se evaluó la interacción del TBBPA con las actividades fenilvalerato esterasa (FVasa) y fenilacetato esterasa (FAc-esterasa) en suero humano y de pollo, analizando su posible uso como biomarcadores de exposición ambiental. También se estudiaron los efectos de los disolventes utilizados como stocks (etanol, metanol y DMSO) y la influencia del EDTA para diferenciar enzimas dependientes de calcio, como la paraoxonasa. Los resultados mostraron que el etanol altera la actividad carboxilesterasa de manera dependiente de la concentración y podría modular la interacción del TBBPA con estas enzimas, mientras que metanol y DMSO a concentraciones ≤0,01% no mostraron interferencias. El TBBPA aumentó la actividad FAc-esterasa en suero humano usando DMSO como stock, sin afectar a FVasa. Estos resultados sugieren que la actividad FAc-esterasa en suero humano podría emplearse como biomarcador de exposición a TBBPA, aunque se requieren estudios adicionales para confirmar su aplicabilidad. Brominated flame retardants, such as tetrabromobisphenol A (TBBPA), are contaminants capable of interfering with key detoxifying enzymes like carboxylesterases. This study evaluated the interaction of TBBPA with FVasa and FAc-esterase activities in human and chicken serum, assessing their potential as environmental exposure biomarkers. The effects of stock solvents (ethanol, methanol, and DMSO) and EDTA were also analyzed to differentiate calcium-dependent enzymes such as paraoxonase. Results showed that ethanol altered carboxylesterase activity in a concentrationdependent manner and may modulate TBBPA interactions, whereas methanol and DMSO at ≤0.01% had no significant effects. TBBPA increased FAc-esterase activity in human serum when DMSO was used as stock, without affecting FVasa. These results suggest that FAc-esterase activity in human serum could be used as a biomarker of TBBPA exposure, although further studies are needed to confirm its applicability. 2025-11-03T16:40:38Z https://hdl.handle.net/11000/37800 Título : Interacción entre patógenos y antibióticos: modelos in vitro para caracterizar la generación de resistencias Autor : Ortiz Rodríguez, Andrea Resumen : La infección causada por el patógeno anaerobio Clostridioides difficile es la principal causa de diarrea nosocomial y conlleva elevadas tasas de morbilidad, mortalidad y gasto sanitario. A pesar de la existencia de tratamiento antibiótico, existen un elevado porcentaje de fracasos con aparición de recurrencias. El antibiótico Metronidazol, considerado como principal opción durante años, ha demostrado ser menos eficiente que otros fármacos, por lo que hoy por hoy, en primera línea se encuentran los antibióticos Vancomicina y Fidaxomicina. La Microbiología clínica no analiza la sensibilidad antibiótica ya que esta patología no se diagnostica mediante cultivo, y por tanto, no se puede realizar el antibiograma. En este contexto, se consideraban todas las cepas como sensibles, aunque han aparecido trabajos que comunican la presencia de cepas resistentes a estos fármacos. Este trabajo analiza la barrera genética de estos fármacos mediante la exposición repetida a concentraciones subinhibitorias de los mismos; pretendiendo simular con este modelo in vitro una pauta posológica incorrecta. A pesar de la repetida exposición a los fármacos, ambos tienen gran dificultad para seleccionar mutantes resistentes, destacando que la Fidaxomicina cuenta con una mayor barrera genética que la Vancomicina. Infection caused by the anaerobe pathogen Clostridioides difficile is the main cause of nosocomial diarrhoea, and implies high rates of morbidity, mortality and health input. Although it does exist antibiotic treatment, there is also a great rate of failure and recurrence appearing. Metronidazol, considered as the main option for years, has demonstrated to be less efficient than other treatments, therefore, currently only Vancomycin and Fidaxomicin are found in first line. Clinical microbiology does not analyse sensibility, since this pathology is not diagnosed through culture, and therefore, the antibiogram cannot be done; though all strains were considered sensible, some studies have communicated the existence of resistant strains to these antibiotics. This study analyses the genetic barrier of these treatments through the repeated exposure to subinhibitory concentrations of both; intending to simulate with this in vitro model an incorrect dosage. In spite of the repeated exposure, both have great difficulties in selecting resistant mutants, highlighting the great genetic barrier that Fidaxomicin has over Vancomycin. 2025-11-03T16:39:52Z https://hdl.handle.net/11000/37799 Título : Identificación y caracterización de nuevos moduladores del canal iónico TRPV1 basados en la técnica PROTAC Autor : Villena Martínez, Lucía Resumen : Los receptores de potencial transitorio (TRP) son una superfamilia de canales iónicos multifuncionales permeables a una gran variedad de cationes, y cuya activación puede darse por estímulos físicos (temperatura, voltaje, presión y tensión) y químicos. En los últimos años han sido estudiados en profundidad debido a su implicación en numerosas patologías, como trastornos cardiovasculares, cáncer o dolor crónico. Dentro de la subfamilia TRPV, el canal iónico TRPV1 posee una enorme importancia por su polimodalidad y su implicación en enfermedades ampliamente distribuidas, siendo por tanto uno de los más estudiados como posible diana terapéutica. En este contexto, los compuestos PROTAC, encargados de inducir la degradación de proteínas, podrían ser uno de los tratamientos más prometedores para inhibir la actividad patológica de TRPV1. Por todo ello, en el presente trabajo se ha estudiado el efecto de ocho compuestos PROTAC sobre TRPV1, realizando un cribado inicial para estudiar cuales de ellos pueden resultar más prometedores. Además, se realizaron ensayos de permeabilización de la membrana y citotoxicidad para descartar posibles efectos nocivos. Por último, se realizó un ensayo de detección y cuantificación proteica, Western Blot, optimizando previamente el protocolo. En conjunto, bajo las condiciones ensayadas, no se pudo determinar que los compuestos indujeran la degradación del canal. Transient receptor potential (TRP) channels are a superfamily of multifunctional ion channels permeable to a wide variety of cations, whose activation can occur in response to physical (temperature, voltage, pressure, and tension) and chemical stimuli. In recent years, they have been studied extensively due to their involvement in numerous pathologies, such as cardiovascular disorders, cancer, and chronic pain. Within the TRPV subfamily, the ion channel TRPV1 is of great importance due to its polymodality and its involvement in widely distributed diseases, making it one of the most studied targets for potential therapeutic intervention. In this context, PROTAC compounds, which induce protein degradation, could represent one of the most promising treatments to inhibit the pathological activity of TRPV1. For this reason, the present project investigated the effect of eight PROTAC compounds on TRPV1, performing an initial screening to identify the most promising candidates. In addition, membrane permeability and cytotoxicity assays were conducted to rule out possible adverse effects. Finally, a protein detection and quantification assay, Western Blot, was performed, after first optimizing the protocol. Overall, under the conditions tested, it was not possible to demonstrate that the compounds induced channel degradation. 2025-11-03T16:37:30Z