Interacciones del reactivo DTNB en colinesterasas y de la acetiltiocolina en las actividades fenilvaleratoesterasa y fenilacetatoesterasa de la butirilcolinesterasa humana

Abstract

Se ha visto en trabajos previos que la acetiltiocolina (AtCh) a bajas concentraciones aumenta actividad fenilvalerato esterasa (PVasa) en acetilcolinesterasa recombinante humana (AChE) y se inhibe a altas concentraciones. Sin embargo, la actividad fenilacetato esterasa (FAc esterasa) es inhibida a bajas concentraciones de AtCh. La potenciación o inhibición de estas actividades son causadas por la tiocolina liberada en el sitio activo, donde AtCh podría actuar como un caballo de Troya. En este trabajo se han evaluado la actividad PVasa y FAc esterasa en presencia de AtCh con butirilcolinesterasa (BChE) recombinante humana en condiciones similares de ensayo. Los resultados muestran que no se observan interacciones de la AtCh con la actividad PVasa en dichas condiciones experimentales. Por otro lado, se ha visto que el DTNB, reactivo cromogénico utilizado para medir la actividad colinesterasa con colinesterasas en ensayos en continuo (sin detener la reacción), produce cierta inhibición de esta actividad. En este trabajo se han realizado experimentos a tiempo fijo (parando la reacción) para poder determinar la influencia del DTNB en la actividad colinesterasa con AChE y BChE humanas. Se ha observado que hay inhibición de la actividad colinesterasa por DTNB cuyos resultados sugieren que existe un mecanismo más complejo que una inhibición reversible simple en BChE mientras que se ha observado una inhibición leve con AChE que sugiere que la inhibición es reversible.

Previous studies have shown that acetylthiocholine (AtCh) at low concentrations increases phenyl valerate esterase (PVase) activity in recombinant human acetylcholinesterase (AChE) and is inhibited at high concentrations. However, phenylacetate esterase (FAc esterase) activity is inhibited at low concentrations of AtCh. The potentiation or inhibition of these activities is caused by the thiocholine released in the active site, where AtCh could act as a Trojan horse. In this work, PVase and FAc esterase activity have been evaluated in the presence of AtCh with recombinant human butyrylcholinesterase (BChE) under similar assay conditions. The results show that no interactions of AtCh with PVase activity are observed under these experimental conditions. On the other hand, it has been observed that DTNB, the chromogenic reagent used to measure cholinesterase activity in continuous assays (without stopping the reaction), produces some inhibition of this activity. In this work, fixed-time experiments (stopping the reaction) have been carried out in order to determine the influence of DTNB on cholinesterase activity with human AChE and BChE. It has been observed that there is inhibition of cholinesterase activity by DTNB, and the results suggest a mechanism more complex than simple reversible inhibition in BChE, while a mild inhibition has been observed with AChE that suggests the inhibition is reversible.