Extracción y medida simultánea de paratión, paraoxón y 4-nitrofenos por GC/MS para estudios de biotransformación

Abstract

Los compuestos organofosforados de uso insecticida se pueden biotransformar mediante una reacción de "activación tóxica" consistente en una desulfuración oxidativa dando lugar a un metabolito tóxico capaz de inhibir colinesterasas y otras esterasas. Por otra parte, también tienen lugar reacciones de hidrólisis que son su mecanismo principal de destoxicación. El equilibrio entre el proceso de formación del metabolito tóxico y su destoxicación presenta gran importancia y es motivo de estudio en un gran número de modelos experimentales in vitro e in vivo. Analizando esta necesidad, en este trabajo se ha optimizado el método de detección y medida simultánea del compuesto parental, el paratión, su metabolito tóxico, el paraoxón y el producto de hidrolisis p-nitrofenol, por cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (GC/MS). Se co mprobaron parámetros previamente valorados en el laboratorio y se optimizó en detalles otros. Se establecieron condiciones óptimas de inyección sin división ("splitless"), tiempo de purga y temperatura inicial del gradiente de temperatura, medida en modo scan (espectro de masas completo) pero cuantificando con el ion selectivo m/z=139. Se seleccionó el acetato de etilo como disolvente de extracción y se valoró la eficacia de la extracción desde medios acuosos a diversas concentraciones de los analitos. Se hicieron ensayos en preparaciones tras ser sometidas el paraoxón y el paratión a biotransformación con suero de conejo y de pollo obtenidos comercialmente. Se obtuvieron extracciones de alrededor del 80-90% y una reproducibilidad aceptable. Dicha metodología pudría aplicarse en futuros estudios de biotransformación.