Obtención de combinaciones múltiples de alelos mutantes de los genes que codifican las proteínas ICU11, CP2 y sus presuntos interactores físicos en Arabidopsis

Abstract

INCURVATA (ICU11) y CUPULIFORMIS2 (CP2) son proteínas de Arabidopsis parálogas, desigualmente redundantes y con funciones epigenéticas. Se ha demostrado que ICU11 es una proteína accesoria del Polycomb Repressive Complex 2 (PRC2). En el laboratorio de J.L Micol se realizaron ensayos de purificación por afinidad en tándem y de complementación de fluorescencia bimolecular, en los que se demostró que ICU11 y CP2 interaccionan físicamente con componentes principales y proteínas accesorias del PRC2, así como con otras proteínas nucleares, incluidos algunos factores de transcripción. En este trabajo hemos iniciado la obtención de combinaciones múltiples de alelos nulos de los genes ICU11 o CP2 y mutaciones puntuales o insercionales en diez de los que codifican interactores físicos de las proteínas ICU11 y/o CP2. La eventual aparición de sinergia fenotípica en dichos mutantes múltiples revelaría la existencia de interacciones genéticas entre los genes implicados y confirmaría las interacciones físicas previamente detectadas entre las correspondientes proteínas.

Arabidopsis INCURVATA (ICU11) and CUPULIFORMIS2 (CP2) are paralogous proteins, exhibiting unequal functional redundancy and with epigenetic functions. ICU11 has been demonstrated to act as an accessory protein of the Polycomb Repressive Complex 2 (PRC2). In the laboratory of J.L. Micol, tandem affinity purification and bimolecular fluorescence complementation assays were performed, showing that ICU11 and CP2 physically interact with core components and accessory proteins of PRC2, as well as with other nuclear proteins, including several transcription factors. In this study, we initiated the generation of multiple combinations of null alleles of the ICU11 or CP2 genes and point or insertional mutations in ten genes encoding physical interactors of the ICU11 and/or CP2 proteins. The potential emergence of phenotypic synergy in these multiple mutants would reveal the presence of genetic interactions among the implicated genes and confirm the physical interactions previously detected between the corresponding proteins.