FIGURA 1. Firma transcripcional en tejido tumoral humano. Expresión relativa mediante RT-qPCR de un panel de 24 genes en tumores corticotropos funcionantes (CTF) y silentes (CTS), normalizada con TBP y calibrada frente a hipófisis normal. El panel A muestra la mediana y el intervalo intercuartílico de los genes con significación ajustada o asociación nominal de interés mecanístico. El panel B representa los valores q de Benjamini-Hochberg del panel completo. CRHR1, SSTR3 y SSTR5 mostraron menor expresión en CTS y conservaron significación tras el ajuste. PCSK1 presentó menor expresión y NR3C1, FKBP5 y NR0B1 mayor expresión en CTS únicamente en las comparaciones nominales. Comparación mediante U de Mann-Whitney bilateral y corrección de Benjamini-Hochberg sobre 24 contrastes.

FIGURA 2. Cuantificación proteica mediante Western blot. Análisis de 22 proteínas en tumores corticotropos funcionantes (CTF), corticotropos silentes (CTS) y gonadotropos silentes (GTS). El panel A muestra la mediana y el intervalo intercuartílico de proteínas vinculadas a los principales ejes del proyecto y de PD-L1. El panel B representa los valores q de Benjamini-Hochberg de las 22 comparaciones CTF-CTS. Ninguna proteína mantuvo significación tras la corrección por comparaciones múltiples. PD-L1 mostró una diferencia nominal CTF > CTS (p = 0,0086; q = 0,188), que no debe interpretarse como significativa después del ajuste.

FIGURA 3. Perfil de microARN y análisis integrado. Comparación de ocho microARN entre tumores corticotropos funcionantes (CTF) y silentes (CTS). miR-124-5p y miR-21-3p mostraron mayor expresión en CTF y miR-383-5p mayor expresión en CTS; las tres diferencias conservaron significación tras la corrección de Benjamini-Hochberg (q = 0,02815). miR-124-3p fue únicamente nominal. En el análisis integrado se evaluaron 240 correlaciones de Spearman entre microARN y variables moleculares: ocho fueron nominales y ninguna mantuvo significación tras el ajuste global o por subconjunto. No se identificó un regulador postranscripcional único.

FIGURA 4. Secuenciación Sanger de USP8. Se procesaron 41 tumores y 38 resultaron evaluables tras el control de calidad, 19 CTF y 19 CTS; los tres casos no evaluables fueron excluidos. La variante NM_005154.5(USP8):c.2215A>G; p.(Thr739Ala) (rs11638390) se confirmó mediante lecturas bidireccionales en tres tumores, dos CTF y uno CTS. Los cromatogramas anonimizados muestran las lecturas FWD y RVS de los tres casos. No se identificaron variantes activadoras clásicas en la región hotspot de USP8.

FIGURA 5. Validación farmacológica en células AtT-20. Eef2 mantuvo valores de Ct estables entre las seis condiciones experimentales (p = 0,6067). La estimulación con CRH 10 nM durante 24 horas no modificó significativamente Crhr1, Fkbp5, Nr3c1, Pcsk1 ni Pomc. La dexametasona 100 nM redujo Pomc y Pcsk1 y aumentó Fkbp5. Se detectó un efecto global sobre Nr3c1, aunque ninguna comparación individual mantuvo significación tras la corrección de Holm. Crhr1 no mostró cambios significativos y no se detectó interacción CRH × dexametasona. Los resultados confirman la competencia funcional de la vía glucocorticoidea en el modelo, sin demostrar que este mecanismo explique directamente el fenotipo de los tumores humanos.
